生物化学与分子生物学实验指导 双语版

第一篇 实验技术与原理 3

第一章 生物大分子样品制备 3

第一节 材料的选择与处理 4

第二节 细胞破碎 5

第三节 抽提 6

第四节 浓缩与纯化 8

第五节 样品保存 10

第六节 制备方案设计与评价 11

第二章 离心技术 13

第一节 基本原理 13

第二节 离心机的主要构造和类型 14

第三节 差速离心法 17

第四节 密度梯度离心法 17

第五节 分析超离心 19

第三章 层析技术 20

第一节 基本原理 20

第二节 吸附层析 21

第三节 疏水层析 28

第四节 离子交换层析 29

第五节 凝胶过滤层析 35

第六节 亲和层析 39

第四章 电泳技术 44

第一节 基本原理 44

第二节 醋酸纤维素薄膜电泳 45

第三节 聚丙烯凝酰胺胶电泳 46

第四节 印迹法（转移电泳） 48

第五节 毛细管电泳 49

第六节 琼脂糖凝胶电泳 51

第五章 分光光度法 52

第一节 基本原理 52

第二节 紫外－可见光光度法 53

第三节 荧光光谱分析法 56

第六章 分子克隆技术 58

第一节 基本原理 58

第二节 基因片段制备 61

第三节 质粒DNA制备 62

第四节 DNA重组 64

第七章 克隆化基因的表达与检测技术 66

第一节 基本原理 66

第二节 外源基因在原核系统中的表达 69

第三节 外源基因在真核系统中的表达 71

第四节 蛋白质Western blot检测 73

第八章 核酸分子杂交 75

第一节 基本原理 75

第二节 核酸探针的制备和标记 77

第三节 Southern印记 80

第四节 Northern印记 81

第九章 聚合酶链反应（PCR）技术 82

第一节 基本原理 82

第二节 原位PCR 83

第三节 逆转录PCR 84

第四节 实时定量PCR 85

第五节 甲基化PCR 87

第二篇 基础实验操作 91

第十章 蛋白质 91

实验一 从牛奶中分离酪蛋白 91

实验二 蛋白质的定量测定 92

实验三 血清蛋白质的电泳分离 96

实验四 SDS-PAGE测定蛋白质相对分子量 107

实验五 离子交换层析分离混合氨基酸 114

第十一章 核 酸 116

实验六 人外周血基因组DNA提取 116

实验七 肝脏RNA提取（苯酚法） 120

实验八 核酸的定量测定（定磷法、紫外吸收法） 122

实验九 琼脂糖凝胶电泳分离DNA 126

实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离RNA 131

实验十一 人基因组DNA多态性分析 133

第十二章 酶 136

实验十二 胰蛋白酶的分离纯化 136

实验十三 酸性磷酸酶Km和Vmax值测定 138

实验十四 唾液淀粉酶的最适pH测定 146

实验十五 乳酸脱氢酶同工酶分析 148

第十三章 物质代谢 151

实验十六 激素对血糖的调节作用 151

实验十七 转氨基作用（纸层析法） 156

实验十八 肌糖原酵解作用 163

实验十九 血清谷丙转氨酶（SGPT）活性测定（King氏法） 166

实验二十 脂肪酸的β－氧化作用 169

第十四章 分子生物学实验 173

实验二十一 质粒DNA的提取 173

实验二十二 DNA酶切及片段回收 179

实验二十三 PCR体外扩增目的基因 188

实验二十四 反转录PCR（RT-PCR） 196

实验二十五 大肠杆菌感受态细胞制备 199

实验二十六 重组质粒连接、转化与筛选 202

实验二十七 Southern杂交 205

实验二十八 Northern杂交 209

实验二十九 外源基因的诱导表达 212

实验三十 蛋白质印迹法检测蛋白 214

实验三十一 乙型肝炎的PCR诊断 218

第三篇 设计性实验 223

第十五章 设计性实验概述 223

第一节 背景介绍 223

第二节 基本类型和要素 224

第三节 组织实施 225

第十六章 实验选题和设计 227

第一节 实验选题 227

第二节 实验设计 228

第十七章 数据处理与论文撰写 231

第一节 结果观察与记录 231

第二节 数据处理与分析 232

第三节 实验报告的撰写 232

第四节 科研论文的撰写 235

第十八章 实施案例 239

第一节 设计性实验技术模块 239

第二节 设计性实验案例 240

附录 242

参考文献 249