- 作 者：斯越秀编著；王忠华，俞超，谭志文副主编
- 出 版 社：杭州：浙江大学出版社
- 出版年份：2011
- ISBN：9787308088428
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第一部分 基因工程实验技术教学组织实施形式 1
一、实验学习目标 1
二、实验学习要求 1
三、实验教学组织实施流程 2
四、实验报告要求 4
五、文档格式 5
第二部分 基因工程实验技术与原理 15
第一章 基因组DNA的提取 15
第二章 质粒载体 18
第三章 PCR基因扩增与引物设计 22
第四章 DNA重组技术 38
第五章 重组体分析与检测 41
第六章 基因表达 47
第七章 蛋白质分析技术 56
第八章 重组蛋白质的分离纯化与制备 71
第三部分 基础实验 80
实验一 细菌基因组DNA的提取及电泳鉴定 80
实验二 PCR法扩增目的基因及PCR产物的纯化 85
实验三 碱裂解法提取质粒载体及电泳鉴定 89
实验四 载体质粒、PCR产物的双酶切及酶切产物纯化 94
实验五 载体片段与PCR产物的连接 99
实验六 感受态细胞的制备和重组质粒的转化 102
实验七 重组子的鉴定 105
实验八 阳性重组质粒转化表达菌株 111
实验九 目的基因的诱导表达和鉴定 113
实验十 表达产物的分离纯化 117
第四部分 综合设计实验 121
项目一 枯草芽孢杆菌碱性磷酸酶基因的克隆与表达 121
项目二 大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达 144
项目三 弧菌外膜蛋白的基因克隆、蛋白表达与纯化 166
项目四 泥蚶谷氨酰胺合成酶基因的克隆和表达分析 189
第五部分 附录 207
一、氨基酸符号及相应的密码子 207
二、常用限制性内切酶酶切位点及缓冲液 208
三、常用市售酸的浓度 208
四、常用蛋白质分子量标准参照物 209
五、常用缓冲液的配制 209
六、分子生物学常用试剂的配制 211
七、琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 213
八、核酸、蛋白质的常用数据 213
九、菌种与DNA的保存 214
十、基因工程实验注意事项 215