真菌生物学实验教程

实验一 壶菌纲、卵菌纲代表菌形态特征观察 1

一、实验目的 1

二、实验原理 1

三、实验材料 1

四、实验内容及步骤 2

五、实验报告（作业） 11

六、思考题 11

七、参考文献 11

附：半永久装片的制作方法 11

实验二 接合菌门真菌的鉴定 12

一、实验目的 12

二、实验原理 12

三、实验材料 12

四、实验内容及步骤 12

五、实验报告（作业） 17

六、思考题 17

七、参考文献 18

附：培养水玉霉图示 18

实验三 子囊菌门代表菌形态特征观察 19

一、实验目的 19

二、实验原理 19

三、实验材料 19

四、实验内容及步骤 20

五、实验报告（作业） 28

六、思考题 28

七、参考文献 28

附：真菌的石蜡制片技术流程 29

实验四 担子菌门代表菌的形态特征观察 31

一、实验目的 31

二、实验原理 31

三、实验材料 31

四、实验内容及步骤 31

五、实验报告（作业） 38

六、思考题 38

七、参考文献 39

附：冷冻切片实验流程及注意事项 39

实验五 半知菌类代表菌形态特征观察 42

一、实验目的 42

二、实验原理 42

三、实验材料 42

四、实验内容及步骤 43

五、实验报告（作业） 48

六、思考题 48

七、参考文献 49

附：扫描电子显微镜样品制作及观察丝状真菌 49

实验六 黏菌基本形态特征的观察 51

一、实验目的 51

二、实验原理 51

三、实验材料 51

四、实验步骤 52

五、实验报告（作业） 53

六、思考题 54

七、参考文献 54

附：几种黏菌属种描述，请在体视显微镜下观察所提供的标本 54

黏菌子实体图例 55

实验七 丝状真菌细胞核的DAPI染色及观察 57

一、实验目的 57

二、实验原理 57

三、实验材料 57

四、实验步骤 58

五、实验报告（作业） 58

六、思考题 59

七、参考文献 59

附：荧光显微镜简介及使用步骤 59

实验八 酿酒酵母原生质体制备与再生 62

一、实验目的 62

二、实验原理 62

三、实验材料 62

四、实验步骤 63

五、实验报告（作业） 64

六、思考题 64

附：几种细菌过滤器及其使用 65

实验九 稻巨座壳菌自噬体的显微观察 66

一、实验目的 66

二、实验原理 66

三、实验材料 68

四、实验步骤 70

五、实验报告（作业） 71

六、思考题 71

七、参考文献 71

实验十 氧化胁迫诱导白假丝酵母细胞凋亡的荧光检测 72

一、实验目的 72

二、实验原理 72

三、实验材料 74

四、实验步骤 75

五、实验报告（作业） 76

六、思考题 76

七、参考文献 76

实验十一 丝状真菌疏水蛋白的分离提取和检测 77

一、实验目的 77

二、实验原理 77

三、实验材料 80

四、实验步骤 80

五、实验报告（作业） 83

六、思考题 83

七、参考文献 83

实验十二 丝状真菌DNA快速提取及其18S rDNA序列测定 84

一、实验目的 84

二、实验原理 84

三、实验材料 85

四、实验步骤 86

五、实验报告（作业） 88

六、思考题 88

七、参考文献 88

实验十三 丝状真菌总RNA及mRNA的提取与检测 89

一、实验目的 89

二、实验原理 89

三、实验材料 92

四、实验步骤 94

五、实验报告（作业） 96

六、思考题 96

七、参考文献 96

实验十四 细菌源耐热木聚糖酶基因在黑曲霉中的表达 98

一、实验目的 98

二、实验原理 98

三、实验材料 101

四、实验步骤 105

五、实验报告（作业） 107

六、思考题 107

七、参考文献 107

实验十五 脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达与目的蛋白检测 108

一、实验目的 108

二、实验原理 108

三、实验材料 110

四、实验步骤 110

五、实验报告（作业） 113

六、思考题 113

七、参考文献 113

实验十六 真核细胞表达异源蛋白的糖基化修饰及检测 114

一、实验目的 114

二、实验原理 114

三、实验材料及试剂 116

四、实验步骤 116

五、实验报告（作业） 118

六、思考题 118

七、参考文献 118

实验十七 多拷贝异源基因重组表达体系的构建及其qPCR检测 119

一、实验目的 119

二、实验原理 119

三、实验材料 120

四、实验步骤 121

五、实验报告（作业） 125

六、思考题 125

七、参考文献 126

附：实时荧光定量PCR仪图示及其基本技术原理详解 126

实验十八 采用重叠PCR技术敲除粟酒裂殖酵母Clr4基因 128

一、实验目的 128

二、实验原理 128

三、实验材料 130

四、实验步骤 132

五、实验报告（作业） 135

六、思考题 135

七、参考文献 135

实验十九 利用细菌CRISPR/Cas系统敲除酿酒酵母目的基因 136

一、实验目的 136

二、实验原理 136

三、实验材料 138

四、实验步骤 139

五、实验报告（作业） 140

六、思考题 141

七、参考文献 141

实验二十 粗糙脉孢菌双基因缺失突变体的构建及双基因的遗传互作分析 142

一、实验目的 142

二、实验原理 142

三、实验材料 144

四、实验步骤 147

五、实验报告（作业） 148

六、思考题 149

七、参考文献 149

附录1常用培养基配方及染色液 150

附录2安斯沃思（Ainsworth， 1973）的分类系统 159

附录3真菌词典第八版（1995年）的分类体系 160

附录4真菌词典第九版（2001年）的分类体系 161

附录5真菌词典第十版（2008年）的分类体系 163

附录6互动实验室设备使用原则及方法（学生端的使用） 165

附录7真菌常用网站 167

附录8常用真菌学名列表 169

附录9真菌图例 179

附录10黏菌子实体图例 185

附录11实验七和实验十彩图 186