- 作 者：汤华主编
- 出 版 社：北京：科学出版社
- 出版年份：2006
- ISBN：7030163311
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1 RNA干扰的发展历史与意义 3
1.1 RNAi的发现 3
第1部分 RNA干扰理论 3
1.2 RNAi的意义 8
2 微小RNA概述 12
2.1 miRNA的发现过程 12
2.2 miRNA的生物学特征 14
2.3 miRNA的基因组学 17
2.4 miRNA的成熟及效应过程 22
2.5 miRNA的功能 25
2.6 展望 29
3.1 RdRP在基因沉默中作用的发现及相关证据 35
3 依赖于RNA的RNA聚合酶 35
3.2 RdRP的生化物理性质及其晶体结构 36
3.3 RdRP与RNA病毒 38
3.4 RdRP和RNA沉默 39
3.5 降级性PCR、过渡性RNAi及系统性RNAi 42
3.6 RdRP作用过程中的问题 45
4 微处理器 49
4.1 微处理器的相关蛋白成分及其对miRNA的加工 49
4.2 pre-miRNA从细胞核输出的过程 52
5 干扰性小RNA产生的关键性蛋白——Dicer 55
5.1 DCR的发现背景 55
5.2 DCR的一般生化属性及相关生物学功能 56
5.3 DCR的作用方式及在不同生物体中的作用 60
5.4 DCR作用的底物——dsRNA及pre-miRNA的特征及来源 68
5.5 DCR的加工产物——siRNA和miRNA 71
5.6 不同生物体中DCR的同源物及其基因 72
6 RNA诱导的沉默复合体 78
6.1 RISC的发现背景 79
6.2 参与RISC组装的小RNA分子及其可能的组装模式 81
6.3 RISC的主要成分——AGO蛋白 85
6.4 RISC在果蝇体内的组装模型 93
6.5 RNAi的剪切模型 95
6.6 RISC指导的靶向性剪切的动力学研究 97
6.7 参与RISC组装及效应过程的相关蛋白质及影响因子 99
6.8 RISC的功能 113
6.9 小结与展望 115
7 细胞核内的RNA干扰途径 124
7.1 RNA指导的DNA甲基化 124
7.2 RNAi和异染色质的形成 128
7.3 RNAi和DNA切除 135
7.4 减数分裂性沉默、配对和RNAi 137
7.5 细胞核内RNAi途径的作用方式 138
7.6 其他生物体中的相关机制 139
7.7 小结与展望 140
第2部分 RNA干扰技术原理与方法 149
8 siRNA或dsRNA的设计与筛选策略 149
8.1 重组质粒方法筛选siRNA 151
8.2 高通量筛选siRNA的微阵列方法 154
9 化学方法合成siRNA 157
9.1 2′-tBDMS方法 158
9.2 2′-TOM方法 159
9.3 2′-ACE方法 159
10 siRNA的体外转录及生物合成方法 161
10.1 PCR siRNA合成法 162
10.2 T7 RNA聚合酶转录法 165
10.3 应用重组人Dicer体外合成siRNA 168
11 基因工程方法制备siRNA 170
11.1 表达元件的构建 170
11.2 载体构建 180
12 siRNA的实验技术方法 191
12.1 siRNA的体外合成及转染方法 191
12.2 体外转录制备dsRNA 198
12.3 基因工程方法制备siRNA及转染细胞的方法 202
12.4 RNAi在其他生物体中的应用研究方法 213
13 miRNA的实验技术方法 234
13.1 miRNA的提取 234
13.2 miRNA克隆 238
13.3 miRNA分子杂交检测技术——Northern印迹 246
第3部分 RNA干扰的应用研究 259
14 RNA干扰在研究基因组功能方面的应用 259
14.1 动植物中的RNAi 259
14.2 RNAi在线虫全基因组功能研究中的应用 262
14.3 RNAi在果蝇研究方面的应用 286
14.4 RNAi技术在锥虫研究中的应用 294
14.5 PTGS在植物基因及基因组功能方面的研究 301
15 RNA干扰在研究胚胎发育方面的应用 319
15.1 RNAi在小鼠卵母细胞和胚胎中的应用 319
15.2 RNAi在鸟类胚胎发育中的研究 336
16 RNA干扰在抗病毒研究中的应用 358
16.1 RNAi抗HIV-1病毒感染 358
16.2 RNAi抗禽类逆转录病毒感染 373
16.3 RNAi抗肝炎病毒感染 377
16.4 RNAi抗流感病毒感染 392
16.5 RNAi抗SARS相关冠状病毒感染 397
16.6 RNAi抗轮状病毒感染 400
17 RNA干扰在肿瘤研究中的应用 410
17.1 目前常用的肿瘤相关基因功能的研究方法 410
17.2 RNAi在肿瘤生物学中的应用 413
17.3 RNAi在基因治疗中遇到的主要问题 435
18 RNA干扰在其他领域的治疗研究 444
18.1 RNAi在心血管疾病中的应用研究 444
18.2 RNAi在神经系统疾病中的应用研究 446
18.3 RNAi在内分泌系统疾病中的研究进展 454
18.4 RNAi在自身免疫性疾病中的应用研究 456
18.5 RNAi在生物学和医学中的应用前景 458
索引 465