生物化学实验技术原理和方法

上篇　生物化学实验技术原理 1

第一章　生物化学实验样品制备技术 1

1.1　植物样品的制备 1

1.2　动物样品的制备 4

1.3　微生物样品的制备 6

第二章　离心技术 9

2.1　基本原理 9

2.2　离心机的种类和基本结构 11

2.3　常用离心技术 13

2.4　离心技术在生物学研究中的应用 16

第三章　层析技术 17

3.1　基本原理 17

3.2　几种常用的层析法 18

4.1　基本原理 29

第四章　电泳技术 29

4.2　电泳的分类 32

4.3　醋酸纤维素薄膜电泳 33

4.4　聚丙烯酰胺凝胶电泳 34

4.5　琼脂（糖）凝胶电泳 38

第五章　分光光度法 41

5.1　基本原理 41

5.2　分光光度计 42

5.3　分光光度技术应用 45

第六章　酶的分离纯化及活力测定 48

6.1　选择材料和预处理 48

6.2　分离纯化 48

6.3　酶活力的测定 51

第七章　放射性同位素技术 56

7.1　基本知识 56

7.2　放射性的测量 57

7.3　放射防护 60

7.4　放射性同位素技术在生物化学研究中的应用 63

第八章　免疫化学技术 65

8.1　抗原和抗血清的制备 65

8.2　酶联免疫吸附法原理 68

8.3　免疫化学技术的应用 74

下篇　生物化学实验方法 75

第九章　糖类化学 75

实验1　糖的定量测定——蒽酮法 75

实验2　还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法 77

实验3　还原糖的测定——Somogyi法 80

实验4　血糖的定量测定——GOD-PAP法 83

实验5　直链淀粉和支链淀粉含量的测定——碘比色法 85

实验6　可溶性糖的硅胶G薄层层析 88

实验7　粗脂肪的提取和定量测定——索氏抽提法 91

第十章　脂类化学 91

实验8　不饱和脂肪酸的反相纸层析 93

实验9　血清总脂的测定 95

实验10　血清总胆固醇含量的测定 97

Ⅰ 磷硫铁法 98

Ⅱ　邻苯二甲醛法 99

第十一章　蛋白质化学 102

实验11　总氮量的测定——微量凯氏定氮法 102

实验12　蛋白质含量的测定 106

Ⅰ 双缩脲法 106

Ⅱ　Folin-酚法 107

Ⅲ　考马斯亮蓝G-250法 110

Ⅳ　紫外吸收法 111

实验13　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 113

实验14　凝胶过滤法测定蛋白质相对分子量 118

实验15　血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 123

实验16　血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 126

实验17　小麦高分子量麦谷蛋白亚基聚丙烯酰胺凝胶电泳 129

实验18　氨基酸双向纸层析 131

实验19　谷物种子蛋白质组分的分离提取 133

实验20　谷物种子中赖氨酸含量的测定 135

实验21　种子蛋白质氨基酸组分分析——氨基酸自动分析仪法 137

实验22　Edman法分析蛋白质及多肽的N-末端氨基酸 138

第十二章　核酸化学 144

实验23　酵母RNA的分离及组分鉴定 144

实验24　肝细胞中核酸的提取与测定 146

Ⅰ 动物肝脏中提取DNA 146

Ⅱ 动物肝脏中总RNA的制备 148

Ⅲ　定磷法测定核酸含量 149

实验25　荧光素酶法测定三磷酸腺苷（ATP） 152

实验26　植物总DNA的提取 153

Ⅰ　SDS法 154

Ⅱ　CTAB法 156

实验27　核酸琼脂糖凝胶电泳 158

实验28　紫外吸收法测定核酸含量 161

实验29　质粒DNA的提取与鉴定 163

实验30　植物DNA的简易大量提取和PCR分析 167

第十三章　酶化学 170

实验31　枯草杆菌蛋白酶活力测定 170

实验32　淀粉酶活性的测定 172

实验33　硝酸还原酶活性的测定 175

实验34　胰凝乳蛋白酶的制备及活力测定 178

实验35　影响酶活力的因素 182

实验36　NBT法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力 186

Ⅰ 电泳法 186

Ⅱ　分光光度法 188

Ⅰ 胰蛋白酶Km值的测定 190

实验37　底物浓度对酶促反应速度的影响——Km的测定 190

Ⅱ 过氧化氢酶Km值的测定 192

实验38　酶浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶活性测定 194

实验39　有机磷农药对胆碱酯酶的抑制作用 197

实验40　碱性磷酸酶的比活性测定 199

实验41　过氧化物同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 201

第十四章　维生素 204

实验42　维生素A的比色测定 204

实验43　维生素C含量的测定 206

Ⅰ 滴定法测定维生素C的含量——2,6-二氯酚靛酚法 207

Ⅱ 紫外比色法测定维生素C的含量 209

实验44　维生素B1和B2的定性测定 211

第十五章　新陈代谢 214

实验45　糖酵解中间产物的鉴定 214

实验46　氨基转换反应——谷丙转氨酶活性测定 216

实验47　脂肪酸的β-氧化 218

第十六章　免疫化学 221

实验48　抗血清的制备及双向免疫扩散测定法 221

实验49　微量免疫电泳法 224

实验50　单向定量免疫电泳（火箭电泳） 226

实验51　酶联免疫吸附测定法（ELISA） 227

附录 230

一、生物化学实验室规则 230

二、实验室安全及防护知识 231

三、常用仪器的使用方法 233

四、常用缓冲溶液的配制 241

五、常用酸碱指示剂 246

六、常用酸碱试剂的浓度及相对密度 247

七、标准溶液的配制和标定 247

八、元素的相对原子质量表 249

九、数据处理 250

主要参考文献 255