生物化学与分子生物学实验教程

第1部分 实验基本知识 1

一、生物化学实验室规则 1

二、实验报告的书写要求 1

第1章 实验基本操作 3

一、玻璃仪器的洗涤与干燥 3

二、吸量管的使用 4

三、移液器的使用 5

四、液体的混匀 8

第2章 实验样品的制备 9

一、血液样品的制备 9

二、尿液的收集 10

三、组织样品的制备 11

第3章 常用的实验方法与技术 12

第1节 分光光度法 12

一、分光光度技术的基本原理 12

二、分光光度法的应用 13

三、分光光度计的基本结构 14

四、常用分光光度计的使用方法 14

第2节 电泳技术 16

一、电泳技术的基本原理 16

二、常用的电泳方法 16

三、电泳技术的应用 17

四、电泳技术使用的相关仪器 18

五、电泳的基本操作方法 18

第3节 层析技术 19

一、吸附层析 19

二、分配层析 21

三、离子交换层析 21

四、凝胶过滤层析 22

五、亲和层析 23

第4节 离心技术 23

一、沉降系数 24

二、离心速度与离心力 24

三、制备性超速离心分离方法 24

四、普通离心机使用时的注意事项 25

第5节 印迹技术 26

一、生物大分子凝胶电泳分离 26

二、固相支持物的选择 26

三、转移 26

四、常用的几种印迹方法 27

第2部分 生物化学实验 29

实验1 蛋白质的呈色和沉淀反应 29

一、蛋白质呈色反应 29

二、蛋白质的沉淀反应 29

实验2 蛋白质含量测定 32

一、Folin-酚试剂法（Lowry法） 32

二、考马斯亮蓝染色法 33

实验3 蛋白质等电点的测定 34

实验4 凝胶层析分离法分离血红蛋白与溶菌酶 35

实验5 肝组织中核酸的分离与鉴定 37

实验6 酶的特异性 39

实验7 影响酶促反应的因素 40

一、温度对酶活性的影响 40

二、pH对酶活性的影响 41

三、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响 41

实验8 食物中维生素C的提取和定量 42

实验9 胡萝卜素柱层析分离法 43

实验10 血糖含量的测定 44

一、邻甲苯胺改良法 44

二、葡萄糖氧化酶法 46

实验11 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 46

实验12 血清尿素氮测定（二乙酰一肟法） 47

实验13 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 49

实验14 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 51

实验15 转氨基作用与氨基酸纸层析 51

实验16 血清谷丙转氨酶的活性测定 53

实验17 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量 55

第3部分 分子生物学基本实验方法 60

实验1 基因组DNA的分离提取 60

实验2 质粒DNA的提取 61

实验3 核酸浓度的测定 63

实验4 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 64

实验5 DNA的酶切 65

实验6 DNA重组、转化与鉴定 68

实验7 Southern印迹转移 71

实验8 Western blot检测蛋白质 74

实验9 RT-PCR 76

第4部分 附录 79

附录1 实验室安全及防护知识 79

一、实验室安全知识 79

二、实验室灭火法 79

三、实验室急救 80

附录2 分子生物学实验中的常用试剂及溶液、缓冲液的配制 80

一、常见市售酸碱的浓度 80

二、有机试剂的配制 81

三、细菌培养基和抗生素 81

四、常用缓冲液的配制 83

五、常见限制性内切酶酶切位点及缓冲液 86

附录3 常用计量单位及符号 87

附录4 希腊字母表 87

参考文献 88