干细胞与再生医学实验教程

第一部分 基础分子生物学实验 1

实验一 实时荧光定量PCR 1

实验二 蛋白质的SDS-PAGE电泳及Western-blot分析 3

实验三 基因克隆 7

实验四 免疫荧光 9

第二部分 干细胞与再生医学相关实验技术 11

第一章 绪论 11

实验一 磁纳米颗粒递送siRNA至人羊膜间充质干细胞 11

实验二 TALEN用于基因打靶 14

实验三 双荧光素酶报告基因检测miRNA的活性 17

第二章 干细胞与再生医学 20

实验一 小鼠脂肪间充质干细胞的分离和培养 20

实验二 小鼠骨髓间充质干细胞的分离和培养 23

实验三 小鼠囊胚的分离及胚胎干细胞的培养及鉴定 26

实验四 小鼠骨髓间充质干细胞的流式分选 29

第三章 皮肤组织干细胞与再生医学 32

实验一 人皮肤表皮干细胞原代培养 32

实验二 人表皮干细胞生长曲线的测定 35

实验三 人皮肤成纤维细胞提取与培养 36

第四章 视网膜及角膜组织干细胞与再生医学 39

实验一 大鼠视网膜色素上皮细胞的原代培养 39

实验二 低氧对大鼠视网膜色素上皮细胞周期分布的影响 41

实验三 兔角膜缘干细胞的分离培养 44

第五章 肺组织干/祖细胞与再生医学 46

实验一 人支气管肺干细胞分离培养及鉴定 46

实验二 胎大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞分离培养及鉴定 48

第六章 肠、肝和胰腺干细胞与再生医学 51

实验一 小鼠胰岛分离培养 51

实验二 小鼠胰岛鉴定方法 53

实验三 免疫组织化学技术检测小鼠胰腺石蜡切片中胰岛素的表达 55

实验四 小鼠肝细胞分离培养及鉴定 58

实验五 移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病 60

第七章 中枢神经组织干细胞与再生医学 63

实验一 小鼠神经干细胞的体外分离培养 63

实验二 大鼠少突胶质细胞的体外分离培养和鉴定 65

实验三 大鼠星形胶质细胞的体外分离培养和鉴定 67

实验四 序贯诱导法小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化 69

实验五 NRSE/RE-1 dsRNA诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经元样细胞 72

实验六 大鼠骨髓间充质干细胞移植促进损伤脊髓的功能恢复 74

第八章 周围神经组织干细胞与再生医学 77

实验一 大鼠骨髓间充质干细胞促进坐骨神经缺损修复 77

实验二 大鼠施万细胞的分离培养 79

第九章 骨和软骨干细胞与再生医学 81

实验一 人羊膜间充质干细胞向成骨细胞分化 81

实验二 人羊膜间充质干细胞向软骨细胞分化 83

第十章 肌和肌腱组织干细胞与再生医学 85

实验一 大鼠跟腱来源肌腱干细胞的培养 85

实验二 应用台盼蓝染色检测大鼠肌腱干细胞存活率 87

实验三 大鼠肌腱干细胞成脂诱导分化实验 89

第十一章 造血干细胞与再生医学 92

实验 人造血干细胞的分离培养 92

第十二章 血管和心脏组织干细胞与再生医学 94

实验一 小鼠动脉血管内皮细胞的原代培养和鉴定 94

实验二 人心脏干细胞分离培养 96

实验三 人外周血内皮祖细胞的分离培养及鉴定 97

实验四 人外周血平滑肌祖细胞的体外培养及鉴定 99

第十三章 肾脏干细胞与再生医学 102

实验 大鼠肾脏乳头部组织干细胞的培养及鉴定 102

第十四章 生殖腺组织干细胞与再生医学 104

实验一 小鼠卵母细胞的采集和培养 104

实验二 小鼠受精卵的采集和培养 106

实验三 小鼠精原细胞的分离培养 108

第十五章 牙源性干细胞与再生医学 111

实验一 大鼠牙髓干细胞的分离培养 111

实验二 大鼠牙髓干细胞向牙本质的诱导分化 113

实验三 人牙周膜干细胞的分离培养 115

第十六章 肢体再生的生物学基础和再生医学 117

实验一 大鼠前软骨干细胞分离培养 117

实验二 家兔牵张成骨实验 119

第十七章 乳腺组织干细胞与再生医学 122

实验一 人乳腺上皮细胞的提取培养 122

实验二 原代人乳腺上皮细胞的鉴定 124

第十八章 羊膜和羊水来源干细胞与再生医学 127

实验一 人羊膜的收集及人羊膜上皮细胞的培养 127

实验二 人羊膜间充质干细胞的培养 129

实验三 人羊膜间充质干细胞外泌体提取及鉴定 131

第三部分 常用试剂配制 135