- 作 者：朱旭芬主编；严庆丰副主编；陈宏宇等编
- 出 版 社：北京：高等教育出版社
- 出版年份：2016
- ISBN：9787040439519
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实验计划表 1
导论 5
第一节 基因工程的四大要素 7
第二节 基因克隆的策略 11
1核酸的提取与检测 14
1-1 基因组DNA的提取 15
1-2 总RNA和mRNA的提取 20
1-3 噬菌体DNA的提取 24
1-4 质粒DNA的提取 28
1-5 核酸的检测 32
1-6 脉冲场凝胶电泳 38
1-7 宏基因组文库的构建 40
2靶基因的获取 46
2-1 PCR扩增 47
2-2 目的基因片段的获取 52
2-3 探针的标记及检测 55
2-4 核酸探针筛选基因文库 62
2-5 反转录PCR 66
2-6 RACE方法 71
2-7 反向PCR 76
2-8 SiteFinding-PCR 79
2-9 功能基因的活性筛选 83
3基因定点突变、沉默与敲除 85
3-1 基因定点突变 86
3-2 基因沉默技术 89
3-3 酵母基因的敲除 95
3-4 哺乳动物基因的敲除 97
3-5 植物基因的敲除 102
4质粒的重组 108
4-1 T-A克隆 109
4-2 感受态细胞的制备 111
4-3 重组质粒的转化 114
4-4 阳性克隆的筛选 117
4-5 DNA序列测定与序列同源性分析 119
5原核表达系统的构建与诱导表达 126
5-1 DNA的酶切反应 127
5-2 靶DNA片段的分离纯化 130
5-3 DNA片段的连接 132
5-4 表达质粒的构建 136
5-5 Southern印迹 140
5-6 靶基因的诱导表达 147
5-7 SDS-PAGE 152
6真核表达系统的构建与表达 158
6-1 外源基因在酵母中的表达 159
6-2 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 166
6-3 外源基因在植物细胞中的表达 171
6-4 qRT-PCR分析 175
6-5 Northern印迹 180
6-6 Western印迹 186
6-7荧光原位杂交 192
7蛋白质的分析与目标产物分离 196
7-1 免疫荧光与激光共聚焦 197
7-2 双向电泳 200
7-3 酵母双杂交 206
7-4 蛋白质浓度的测定 209
7-5 亲和层析 213
参考文献 223
附录1 名词缩写 226
附录2 实验操作及仪器使用注意事项 230
附录3 如何撰写实验报告 234
附录4 常用碱基、氨基酸符号及缓冲液 236
附录5 大肠杆菌基因型 240
附录6 实验仪器 242