- 作 者：汪春蕾，赵敏著
- 出 版 社：哈尔滨：哈尔滨工业大学出版社
- 出版年份：2010
- ISBN：9787560328317
- 标注页数：146 页
- PDF页数：163 页
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第1章 绪论 1
1.1 研究背景 1
1.1.1 研究的目的和意义 1
1.1.2 研究内容及创新点 2
1.2 漆酶的研究概况 2
1.2.1 漆酶的来源、种类及分布 2
1.2.2 漆酶的结构、特性及其作用机理 2
1.2.3 漆酶的应用 4
1.3 细菌漆酶研究概况 7
1.3.1 产漆酶细菌的种类 7
1.3.2 产漆酶细菌筛选方法进展 11
1.3.3 细菌漆酶酶学性质的研究方法进展 12
1.3.4 细菌漆酶应用的研究进展 15
1.4 细菌漆酶的分子生物学研究进展 17
1.5 固定化酶技术 18
1.5.1 固定化酶的定义 18
1.5.2 固定化酶的优点 18
1.5.3 酶的固定化方法 19
1.5.4 固定化酶的应用 20
1.6 大肠杆菌表达系统 21
1.6.1 大肠杆菌表达系统特点 21
1.6.2 表达系统的构成 21
1.6.3 重组基因的表达特点 23
1.6.4 蛋白质表达部位 24
第2章 产漆酶细菌的筛选与鉴定 27
2.1 实验材料与仪器 27
2.1.1 材料 27
2.1.2 试剂 27
2.1.3 仪器 28
2.1.4 试剂配制及培养基 28
2.2 实验方法 31
2.2.1 筛选方法 31
2.2.2 形态特性研究 31
2.2.3 生理生化特性研究 33
2.2.4 16S rDNA鉴定 34
2.3 结果与分析 38
2.3.1 高产漆酶菌株的分离 38
2.3.2 形态及生理生化特性 38
2.3.3 分子生物学鉴定 40
2.4 讨论 42
2.5 小结 44
第3章 B.subtilis WD23的生物学及其酶学性质研究 46
3.1 实验材料与仪器 46
3.1.1 材料 46
3.1.2 试剂与培养基 46
3.1.3 仪器 47
3.2 实验方法 47
3.2.1 B.subtilis WD23的生物学特性 47
3.2.2 粗提液的制备与酶活测定 48
3.2.3 细菌芽孢漆酶酶学性质研究 49
3.2.4 细菌芽孢漆酶对染料的脱色实验 51
3.3 结果与分析 51
3.3.1 B.subtilis WD23的生物学特性 51
3.3.2 产芽孢率与细菌漆酶活性的关系 54
3.3.3 细菌芽孢漆酶酶学性质研究 55
3.3.4 细菌芽孢漆酶对染料的脱色实验 60
3.4 讨论 61
3.5 小结 62
第4章 细菌芽孢漆酶的固定化及其应用 63
4.1 实验材料 63
4.1.1 菌株 63
4.1.2 试剂与培养基 63
4.1.3 仪器 64
4.2 实验方法 64
4.2.1 固定化细菌芽孢漆酶微胶囊的制备 64
4.2.2 微胶囊性能测定方法 65
4.2.3 芽孢漆酶酶活测定方法 65
4.2.4 固定化芽孢漆酶酶学性质 66
4.2.5 造纸废水黑液的降解试验 68
4.3 结果与分析 69
4.3.1 微胶囊性能测定 69
4.3.2 固定化芽孢漆酶酶学性质 70
4.3.3 造纸废水黑液的降解试验 73
4.4 讨论 75
4.5 小结 75
第5章 B.subtilis WD23的CotA基因的克隆与异源表达 77
5.1 材料 77
5.1.1 菌株 77
5.1.2 试剂 77
5.1.3 仪器 78
5.1.4 试剂配制及培养基 78
5.2 实验方法 79
5.2.1 B.subtilis CotA基因的克隆 79
5.2.2 pET22b/CotA重组表达载体的构建及鉴定 83
5.2.3 CotA重组蛋白的诱导表达条件的优化 89
5.3 结果与分析 92
5.3.1 CotA基因的PCR扩增 92
5.3.2 重组质粒pMD18-T/CotA的构建及鉴定 93
5.3.3 pET22b/CotA重组表达载体的构建及鉴定 95
5.3.4 CotA重组蛋白的诱导表达条件的优化 109
5.4 讨论 112
5.5 小结 115
第6章 CotA蛋白的纯化及其酶学特性的研究 117
6.1 实验材料 117
6.1.1 菌种 117
6.1.2 试剂 117
6.1.3 仪器 117
6.1.4 试剂配制 118
6.2 实验方法 119
6.2.1 CotA蛋白的纯化 119
6.2.2 CotA漆酶酶学性质的研究 122
6.2.3 CotA漆酶对染料的脱色实验 124
6.3 结果与分析 125
6.3.1 CotA蛋白的纯化 125
6.3.2 CotA漆酶酶学性质的研究 127
6.3.3 CotA漆酶对染料的脱色实验 130
6.4 讨论 131
6.5 小结 132
结论 134
参考文献 137