生物化学与分子生物学实验指导

实验须知 1

实验基本操作 4

一、玻璃仪器的洗涤 4

二、吸量管的使用 5

三、定量吸（移）液器 5

四、容量瓶及量筒 6

五、离心机及其使用方法 6

六、溶液的混匀 6

七、保温 7

八、过滤 7

九、加热 7

实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 8

实验二 蛋白质的两性性质及等电点测定 12

实验三 血清蛋白质的盐析及白球比的测定 15

实验四 双缩脲法测定血清蛋白质的含量 20

实验五 凯氏定氮法测定蛋白质含量 23

实验六 RIPA法提取肝总蛋白质 27

实验七 血清蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 29

实验八 影响酶活性的因素 33

一、温度对酶活性的影响 33

二、pH对酶活性的影响 34

三、激动剂和抑制剂对酶活性的影响 35

实验九 酶的竞争性抑制作用 37

实验十 维生素C的定量测定 39

实验十一 胰岛素、肾上腺素对家兔血糖浓度的影响 43

实验十二 饱食和饥饿小白鼠肝糖原含量的比较 46

实验十三 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度 48

实验十四 血清中甘油三酯的测定 51

一、方法一 52

二、方法二 53

实验十五 血清中总胆固醇的测定 55

实验十六 酮体的生成和利用 57

实验十七 过氧化脂质的测定 61

实验十八 血清中肌酐浓度的测定（除蛋白碱性苦味酸法） 63

实验十九 核酸的定量测定（紫外吸收法） 65

实验二十 组织DNA的提取与鉴定 68

实验二十一 DNA和RNA浓度的检测 71

实验二十二 大肠杆菌质粒DNA的提取与纯化 73

实验二十三 肝总RNA的提取与琼脂糖凝胶电泳鉴定 78

实验二十四 反转录聚合酶链反应检测肝甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA 81

实验二十五 大肠杆菌的转化及重组子的筛选 87

实验二十六 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 91

实验二十七 质粒DNA的限制性内切酶消化及鉴定 94

实验二十八 质粒DNA与外源DNA的连接 97

实验二十九 人血管生长因子基因（hVEGF）的PCR定点突变 99

实验三十 荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸 103

生物化学与分子生物学常用仪器设备介绍 107

一、通风橱 107

二、恒温摇床 108

三、细菌培养箱 109

四、PCR仪 112

五、台式高速离心机 113

六、比色分析法及721-B型分光光度计 115

七、微量移液器 117

八、数显恒温水浴锅 119

九、超净工作台 120

十、高压蒸汽灭菌锅 121

十一、pH计 123

十二、涡旋仪 124

分子生物学实验技术无菌操作原则 125

分子生物学实验无菌操作技术及注意事项 126

一、玻璃器皿的消毒和清洁 126

二、无菌器材和液体的准备 127

三、无菌操作过程 127

四、常用清洁液的配制方法 127

实验报告格式与内容 128