生物工程技术实验指导

第一章 外源基因在哺乳动物中的表达与检测 1

第二章 基因突变和蛋白质工程 5

第三章 色谱（层析）技术 11

第四章 蛋白电泳技术 21

第五章 生物大分子的分离纯化及鉴定 29

第六章 蛋白质的免疫检测技术 34

第七章 酶工程概述及酶的固定化 38

第八章 单克隆抗体制备技术 45

第九章 转基因动物技术 54

第十章 植物细胞工程的基本原理和方法 60

第十一章 微生物发酵与发酵工程 71

第十二章 基因工程制药技术与原理 77

参考书目 82

实验一 β-半乳糖苷酶基因（lac Z）的定点突变 83

基因工程和蛋白质工程 83

实验二 β-半乳糖苷酶基因（lac Z）的定点突变片段的克隆 87

实验三 β-半乳糖苷酶基因（lac Z）在大肠杆菌中的表达及活性检测 90

实验四 β-半乳糖苷酶基因（lac Z）在真核细胞MCF-7中的表达 92

实验五 野生型及点突变的MMLV反转录酶的活力和构象比较 95

实验六 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 98

实验七 蛋白质的变性和复性 102

酶工程 105

实验八 溶菌酶的提取和系列性质测定 105

实验九 植物细胞培养和次生代谢产物生产 118

实验十 β-半乳糖苷酶的固定化及应用 123

实验十一 亲和层析法分离植物钙调素结合蛋白 129

实验十二 蛋白质的N端氨基酸测定 131

细胞工程 137

实验十三 小鼠单克隆抗体的制备 137

实验十四 绿色荧光蛋白质基因在哺乳动物细胞中的表达与检测 145

实验十五 显微注射法制备转基因小鼠 148

实验十六 烟草叶片愈伤组织诱导和器官发生 152

实验十七 烟草原生质体分离和体细胞杂交 156

实验十八 农杆菌与烟草叶片的共培养和转基因细胞的筛选与鉴定 161

发酵工程 169

实验十九 固体发酵法生产柠檬酸 169

实验二十 液体发酵法生产链霉素 173

实验二十一 基因工程药物制备技术 177

附录一 生物工程技术常用缓冲液、培养基及重要试剂的配制 183

一、常用缓冲液的配制 183

二、常用基因工程缓冲液 188

三、常用电泳缓冲液 189

四、常用凝胶加样缓冲液 189

五、常用限制性内切酶酶切位点及缓冲液 190

六、基因工程常用贮存液 191

七、常用培养基 193

八、常用植物组织培养培养基 197

九、常用抗生素溶液 199

附录二 生物工程技术相关实验资料和常用数据 200

一、常用单位及换算方法 200

二、常用核酸、蛋白质换算数据 200

三、线性DNA的长度（kd）与其相对分子质量的关系 201

四、氨基酸符号及相应密码子 201

五、常见市售酸碱的浓度 202

六、各种浓度酸碱贮存液的近似pH值 202

七、硫酸铵饱和度的常用表 203

八、某些生物大分子、亚细胞器及微生物的沉降系数 204

九、几种主要同位素的衰变及半衰期 204

十、离心机转速与相对离心力的换算和列线图 205

十一、层析法用于生物工程的常用数据 206

十二、细胞培养中可能出现的问题、原因及解决方法 208

十三、菌种保存 209