基因克隆和DNA分析 第5版 中文版

第一部分 基因克隆和DNA分析的基本原理 1

第1章 为什么说基因克隆与DNA分析非常重要 3

1.1 遗传学的早期发展 3

1.2 基因克隆和聚合酶链反应（PCR）的出现 3

1.3　什么是基因克隆 4

1.4　什么是PCR 5

1.5 为什么基因克隆和PCR如此重要 7

1.6　如何使用这本书 10

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第2章　基因克隆的载体——质粒和噬菌体 12

2.1 质粒 12

2.2 噬菌体 16

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第3章　从活细胞中纯化DNA 25

3.1 全细胞DNA的制备 25

3.2　质粒DNA的制备 36

3.3　噬菌体DNA的制备 41

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第4章　DNA纯化后的利用 48

4.1　DNA操作酶的范围 48

4.2　切割DNA的酶——限制性内切酶 54

4.3　连接——将DNA分子连接到一起 68

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第5章　将DNA引入活细胞 76

5.1 转化——使细菌细胞获取DNA 78

5.2　重组体的鉴定 81

5.3 将噬菌体DNA引入细菌细胞 85

5.4 重组噬菌体的鉴别 88

5.5 将DNA引入非细菌细胞 90

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第6章　大肠杆菌的克隆载体 93

6.1 基于大肠杆菌质粒的克隆载体 93

6.2　基于M13噬菌体的克隆载体 99

6.3　基于λ噬菌体的克隆载体 105

6.4　λ载体和其他高容量的载体使基因组文库得以建立 112

6.5　其他细菌的克隆载体 113

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第7章　真核生物的克隆载体 114

7.1 酵母和其他真菌的载体 114

7.2 高等植物的克隆载体 120

7.3　动物的克隆载体 129

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第8章　怎样获得特定基因的克隆 134

8.1 筛选的难题 134

8.2　直接筛选目的基因 136

8.3 从基因文库中鉴定克隆 138

8.4　鉴定克隆的方法 142

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第9章　聚合酶链反应（PCR） 154

9.1 PCR简介 154

9.2　PCR的更多细节 156

9.3 Taq聚合酶的错误率问题 164

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第二部分 基因克隆和DNA分析在研究中的应用 167

第10章　基因的位置和结构的研究 169

10.1 如何定位一个基因 169

10.2 DNA测序——预测基因的结构 175

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第11章　基因表达和功能的研究 186

11.1 克隆基因转录的研究 186

11.2　基因表达调控的研究 195

11.3　鉴定和研究克隆基因的翻译产物 202

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第12章　基因组研究 214

12.1 基因组学——怎样进行基因组测序 214

12.2　后基因组学——试着理解基因组的序列 224

12.3 转录物组和蛋白质组的研究 228

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第三部分 基因克隆和DNA分析在生物技术中的应用 233

第13章　克隆基因的表达 235

13.1 在大肠杆菌中的外源基因表达载体 237

13.2　在大肠杆菌中表达重组蛋白存在的问题 245

13.3 真核细胞中重组蛋白的表达 247

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第14章　基因克隆和DNA分析在医学中的应用 254

14.1 重组药物的生产 254

14.2　人类疾病相关基因的识别和鉴定 263

14.3　基因治疗 267

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第15章　基因克隆和DNA分析在农业中的应用 271

15.1 植物基因工程中的基因添加 271

15.2　基因消减 280

15.3 转基因植物的问题 284

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第16章　基因克隆和DNA分析在法医学和考古学中的应用 289

16.1 利用DNA分析鉴定犯罪嫌疑人 289

16.2 利用DNA指纹图谱分析血缘关系 292

16.3 通过DNA分析进行性别鉴定 295

16.4 古遗传学——利用DNA研究人类进化 297

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术语表 302

索引 315