生物化学与分子生物学实验教程

上篇　生物化学与分子生物学基本理论第一章　实验室基本知识 1

第一节　实验室规则 1

第二节　实验记录与实验报告 2

第三节　实验用纯水的制备 3

第四节　实验样品的制备 6

第五节　实验室基本操作技术 7

第二章　光谱分析技术 12

第一节　吸收光谱分析技术 12

第二节　发射光谱分析技术 15

第三节　散射光谱分析技术 17

第三章　电泳技术 18

第一节　电泳的基本原理 18

第二节　影响电泳的因素 19

第三节　电泳技术的分类 21

第四节　几种常用电泳技术 22

第四章　层析技术 27

第一节　层析技术的原理与分类 27

第二节　常用的层析技术 30

第三节　高效液相层析法 33

第五章　离心技术 35

第一节 离心技术的基本原理和分类 35

第二节　离心分离方法 37

第三节　离心机的结构与分类 38

第六章　分子生物学基本技术 41

第一节　核酸分子杂交技术 41

第二节　聚合酶链反应技术 45

第三节　基因克隆技术 50

第四节　其他分子生物学技术 55

下篇　生物化学与分子生物学实验第七章 蛋白质 61

实验一　双缩脲法测定血清总蛋白 61

实验二　考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度 63

实验三　紫外分光光度法测定总蛋白 65

实验四　溴甲酚绿法测定血清清蛋白 67

实验五　血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 69

实验六　蛋白质的盐析 73

实验七　蛋白质的两性解离和等电点的测定 74

实验八　氨基酸的薄层层析 76

实验九　凝胶层析法脱盐和分离蛋白质 78

实验十　SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子质量 80

第八章　酶学 85

实验一　影响酶活性的因素 85

实验二　蔗糖酶的专一性 88

实验三　血清乳酸脱氢酶同工酶的分离 90

实验四　赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶 92

实验五　琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 95

实验六　精氨酸酶的作用 96

第九章　糖代谢 98

实验一　葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 98

实验二　饱食和饥饿对肝糖原含量的影响 100

实验三　肌乳酸测定 101

第十章　脂类代谢 103

实验一　磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯 103

实验二　胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 105

实验三　磷钨酸-镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白-胆固醇 107

实验四　免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白B100 109

实验五　血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 110

第十一章　维生素 113

实验一　维生素B1的荧光测定法 113

实验二　维生素B2的荧光测定法 114

实验三　2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量 116

第十二章　核酸 118

实验一　酵母RNA的提取及组分鉴定 118

实验二　真核细胞基因组DNA的提取与鉴定 120

实验三　质粒DNA的提取、纯化和鉴定 122

实验四　从组织或培养的细胞中分离总RNA 125

实验五　DNA的限制性内切酶消化 127

实验六　大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 129

实验七　聚合酶链反应技术体外扩增DNA 131

实验八　DNA的Southern印迹杂交技术 133

实验九　RNA的Northern印迹杂交技术 137

第十三章　综合性实验 141

实验一　碱性磷酸酶的提取、比活性及Km值的测定 141

实验二　血清γ-球蛋白的分离与纯化 146

实验三　逆转录PCR技术 148

实验四　蛋白质印迹 151

实验五　ApoE基因多态性分析 154

附：FABP2基因多态性分析 158

实验六　DNA的重组技术 160

附录1 常用单位换算法 165

附录2　实验室常用酸碱的密度和浓度 167

附录3　化学试剂纯度分级表 168

附录4　酸碱指示剂 169

附录5　待测溶液的颜色和选用滤光片的对应关系 170

附录6　常用蛋白质分子量标准参照物 171

附录7　常用DNA分子量标准参照物 172

附录8　常用的电泳缓冲液 173

附录9　常用贮存液的配制 174